30.10.2007
Требования к забору, регистрации и транспортировке материалов для исследования на ВИЧ
1. Кровь у обследуемого берется натощак, накануне не рекомендуется употребление жирной пищи.
2. Забор кровипроизводится медицинским персоналом в процедурном кабинете лечебно-профилактического учреждения из локтевой вены в чистую сухую центрифужную пробирку в количестве 5 мл. Перед тем как осуществить забор крови, записать данные пациента в своем регистрационном журнале и направление с документа, устанавливающего его личность (паспорт, свидетельство о рождении). Вымыть руки с мылом, надеть перчатки. Маркировать пробирку согласно номеру в регистрационном журнале и направлении. Усадить пациента так, чтобы его нерабочая рука могла свободно лежать на столе, за которым будет осуществляться взятие крови. Надо выбрать наиболее крупную вену и обработать руку тампоном, смоченным 70 % этиловым спиртом. Открываем и готовим одноразовый шприц на глазах пациента, накладываем жгут выше места прокола. Руку обрабатываем спиртовым тампоном, производим прокол, оттягиваем поршень шприца и набираем не менее 5 мл крови. Сброс крови со шприца в пробирку должен производиться медленно по стенке пробирки во избежание гемолиза.
3. Взятая для исследования цельная кровь должна быть доставлена в диагностическую лабораторию в течение 24 часов с момента взятия крови. В случае невозможности доставки образцов крови в установленное время материал пересылается только в виде сыворотки (без сгустков) в течение 5 дней с момента взятия крови при условии ее хранения до отправки в диагностическую лабораторию СПИД при температуре плюс 4-80С. Количество доставляемой сыворотки должно быть не менее 1,0 мл.
Сыворотка отделяется от сгустка крови центрифугированием. Отделенная сыворотка переносится в сухую, чистую пробирку при помощи дозатора с одноразовым наконечником, маркируется и хранится до 5 дней при температуре 4 - 80С.
Во избежание контаминации образцов, запрещается использовать палочки (стеклянные, металлические и т.п.), для обводки забранной крови в пробирке.
4. Доставка образцов крови осуществляется специальным транспортом, специально выделенным для этой цели подготовленным медицинским персоналом учреждения, в специальной одежде (халат, шапочка или косынка). Запрещается посылать материал через водителя или другое немедицинское лицо.
5. Доставка материала в общественном транспорте категорически запрещается.
6. Пробирки с образцами в центрифужных пробирках устанавливаются в штативы. На каждой пробирке карандашом по стеклу проставляется порядковый номер. Количество пробирок и их нумерация должны строго соответствовать списочному составу в направлениях. Для герметизации пробирок не допускается использование ватно-марлевых тампонов. Запрещается обворачивать пробирки направлением. Образцы доставляются в сумке-холодильнике, биксе, металлическом контейнере с соблюдением холодового режима.
Направления заполняются в 2-х экземплярах по утвержденной форме (ф-506/у). Направления вкладываются в отдельный пакет, затем помещаются в бикс с образцами.
Лечебно-профилактические учреждения, второй экземпляр направлений с результатами ИФА, иммуноблота обязаны забирать своевременно в течении 5 дней.
При доставке первично-серопозитвных в ИФА сывороток для контрольного исследования необходимо представить отдельное направление (ф-509/у) в 2-х экземплярах с указанием всех паспортных данных, включая дату обследования, серию, тип диагностикума, результаты проведенных анализов. В направлении обязательно необходимо ставить пометку «первично», «повторно», «диспансерный». На одноразовых герметично закрытых пробирках, в которых доставляется сыворотка, наряду с номером пробирки должна обязательно писаться фамилия исследуемого.
В лаборатории поступившим образцам должны обязательно присваиваться лабораторные регистрационные номера и для подготовки к постановке рабочие номера. Поступившая сыворотка должна храниться до полного завершения исследований и выдачи окончательного результата.
Поступаемые сыворотки должны быть без гемолиза, бактериального пророста, хилёза. При наличии вышеуказанных нарушений сыворотка бракируется и заносится в бракеражный журнал (ф-250 /у).
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА (ИФА)
Контроль качества – это совокупность методов и действий, которые используются для выполнения требований по обеспечению качества.
На все этапы лабораторного процесса (преаналитический, аналитический, постаналитический) в лаборатории должны быть разработаны и утверждены стандартные операционные процедуры (СОП- форма №1).
Качество проводимого ИФА в диагностических лабораториях зависит от очень многих факторов: качества тест-систем, условия их хранения, температурного режима помещений, спектрофотометра, термостата, точности работы автоматических пипеток, квалификации сотрудников лаборатории. Температура воздуха в лаборатории должна быть в пределах 18-21 градусов т.к. колебания температуры влияют на результаты анализов. Необходимо своевременно проводить ежегодную метрологическую поверку аппаратуры и оборудования (Госстандартизация). Ежедневно вести контроль и запись температурного режима в холодильниках, морозильниках и термостатах.
Тест-системы необходимо хранить в холодильниках при температуре плюс 4-80 С.
Для того чтобы убедиться в достоверности результатов анализа в процессе постановки необходимо проводить контроль. Различают внутренний и внешний контроль качества.
Внешний контроль качества 2 раза в году проводит Референс-лаборатория Министерства Здравоохранения совместно со специалистами РЦ СПИД.
При постановке ИФА, помимо контролей указанных в инструкции дополнительно ставится внутренний контроль – «положительная» сыворотка, закупленная в референс-лаборатории или приготовленная самой лабораторией.
Для проведения внутреннего контроля необходимо приготовить проверенные ИФА-положительные сыворотоки от ВИЧ-инфицированных лиц. Необходимо, чтобы оптическая плотность (ОП) ВИЧ «положительных» сывороток тест-системы, была примерно в 1,5 разе выше оптической плотности сыворотки.
Далее методом ИФА определяется оптический показатель сыворотки, затем отбираются сыворотки с оптическим показателем в 1,5 раза выше ОП критической. В дальнейшем «положительная» сыворотка будет использоваться как контрольный образец. Приготовленные образцы в объеме 200-300 мкл замораживаются в одноразовых пробирках. Для использования, перед постановкой сыворотки размораживают и доводят до температуры 18-20º С.
Проведение первичных скрининговых исследований на антитела к ВИЧ.
Первичные скрининговые исследования на выявление антител к ВИЧ ИФА методом осуществляются районными, межрайонными, областными, научно исследовательскими институтами, Ташкентским городским и Республиканским диагностическими лабораториями СПИД. Исследуются сыворотки, первично взятые от различных контингентов, подлежащих обследованию на антитела к ВИЧ в соответствии с СанПиН № 0187 2005 г скрининговые ИФА исследования проводятся в несколько этапов.
Проведение исследований сывороток можно осуществлять с применением нескольких стрипов из тест-систем во избежание накопления и задержки выдачи ответов.
При каждой постановке ИФА, не зависимо от количества использованных стрипов необходимо проставлять контроли в строго определенном количестве, указанном в инструкции тест системы.
1 этап. Каждый образец сыворотки исследуется в одной лунке. Категорически запрещается исследовать в одной лунке сыворотки от 2-х и более лиц. При получении отрицательного результата при первичной постановке, сыворотка расценивается как отрицательная и исследование прекращается. Если результат ИФА будет положительным, данная сыворотка тестируется по 2 этапу.
2 этап. Исследования проводятся повторно при наличии другой тест-системы или на той же тест-системе на 2-х лунках. При получении положительного результата производится комиссионное (с участием эпидемиолога, лаборатории, инфекциониста) повторное взятие 2-го образца крови с паспортными данными у этого лица. Данная сыворотка исследуется повторно в ИФА. При получении положительного результата в районных, межрайонных лабораториях сыворотка второго забора в количестве не менее 1,5 мл переливается в одноразовые полистероловые пробирки с герметично закрывающейся крышкой и направляются для подтверждения в лаборатории Каракалпакского, областных и городского Центров СПИД. При получении положительного результата в направлениях необходимо указать «исследования продолжаются».
3 этап. В лабораториях Республики Каракалпакстан, областных и городского Центров СПИД поступившие сыворотки тестируются на тест-системах 3-4 поколения российского или зарубежного производства на 2-х лунках. Позитивные сыворотки, кроме анонимных, которые подтверждены в лабораториях Каракалпакского, областных и городского Центров СПИД, направляются для подтверждения в РЦ СПИД.
Подтверждающие исследования, проводимые в лаборатории РЦ СПИД.
Диагностическая лаборатория РЦ СПИД является референсной, арбитражной лабораторией, а также организационно-методическим центром.
Данная лаборатория контролирует качество работы всех диагностических лабораторий СПИД республики.
В диагностическую лабораторию РЦ СПИД поступают на подтверждение все первично-позитивные в ИФА сыворотки, выявленные в региональных диагностических лабораториях СПИД республики. Сыворотки считаются ИФА положительными только после подтверждения в лаборатории Республиканского Центра СПИД.
1 этап. Поступившие на подтверждение сыворотки исследуются на тест-системах 3-4-го поколения российского или зарубежного производства в одной лунке. При получении отрицательного результата окончательный результат считается отрицательным. При получении положительного результата эти сыворотки регистрируются в журнале (ф-501/у) и исследуются методом иммуноблота. В некоторых случаях при получении неопределенного результата в ИФА или на основании эпидемиологических и клинических данных необходимо проводить 2-й этап исследований.
2 этап. Анализы проводятся на другой или на той же тест-системе в 2-х лунках. На основании данных, полученных на 2-х тест-системах, результат оценивается как положительный или отрицательный.
